Preparación de una muestra para microscopio óptico, microscopio electrónico y un microscopio de barrido

Aunque por lo general, los ATV realizan sus funciones en clínicas veterinarias u otros centros como residencias caninas, zoológicos, etc.; otros tienen la suerte de trabajar en clínicas u hospitales donde se dispone de laboratorios y, por lo tanto, sus funciones vas un poco más allá de simplemente tratar con el público; por ello hoy vamos a hablar un poco sobre como debe prepararse una muestra para ser estudiada bajo el microscopio, y que diferencia hay en la preparación de muestras de acuerdo a los diferentes tipos de microscopios empleados.

Preparación de una muestra para ser analizada en microscopio óptico convencional:

Muestra la composición química de las células con más claridad y se usan distintos tipos de tintes según la muestra o lo que queramos contrastar.

Pasos:

1. Fijar muestra.
2. Incrusión en parafina para proseguir con los cortes.
3. Deshidratar.
4. Cortar en secciones más delgadas.
5. Se realiza tinción.
6. Rehidratar
7. Teñir con el colorante adecuado.
8. Aclarar exceso de tinte.
9. Deshidratar y montar cortes.
10. Esperar antes de observar.

Preparación de una muestra para ser analizada por microscopio electrónico:

Aquí los cortes deben ser más finos que en cualquier otro microscopio y se usan tintes y contrastes distintos.

Pasos:

1. Realizar cortes.
2. Sumergir en solución tamponada.
3. Fijar con tretróxido de omio.
4. Incrusión de la muestra con resinas sintéticas.
5. Quitar exceso de fijador deshidratando y haciendo incrusión en la resina.
6. Polimerizar resina.
7. Poner en portabloques.
8. Quitar exceso de resina.
9. Realizar cortes más finos y teñirlos.
10.  Observar.

Preparación de una muestra para ser analizada en microscopio de barrido:

Se diferencia de los demás microscopios en que sólo nos da una vista superficial de la muestra.

Pasos:

1. Fijar muestra y secar con evaporador de vacío.
2. Cubrir muestra en vacío con metal pesado. (para estabilizar la capa de metal ésta se cubre con una capa de carbono evaporada de un electrodo de carbón adyacente)
3. El microscopio hace que la muestra libere electrones.
4. Observar.

Diferencias que hay entre la preparación de una muestra para microscopio óptico, un microscopio electrónico y un microscopio de barrido

A la hora de seleccionar la muestra los bloques de tejido se hacen mucho más pequeños para el microscopio electrónico que para el microscopio óptico, así permite que la fijación sea rápida y que se puedan a hacer cortes más finos.

El microscopio de barrido permite estudiar la superficie de muestras no cortadas, sólo puede examinar las características superficiales de la muestra y su capacidad de resolución es limitada por el grosor de la cubierta metálica.

Para la fijación de la muestra para el microscopio óptico se realiza en una solución acuosa de formaldehído al 5%; para el microscopio electrónico los pequeños bloques se sumergen en una solución tamponada de glutaraldehído  al 2,5-5% o en una solución tamponada de glutaraldehído y paraformaldehído; para el microscopio de barrido se fija la muestra y se seca con un evaporador de vacío.

Para el microscopio electrónico después de lavar los bloques con tampón normalmente se hace una fijación de tetróxido de osmio.

Para el microscopio de barrido se cubre la muestra, en vacío, con una fina capa de metal pesado y se estabiliza esta capa de metal con una capa de carbono evaporada de un electrodo de carbón adyacente.

Para el microscopio óptico la muestra  se incluye en parafina; para le microscopio electrónico la inclusión de la muestra se realiza en resinas sintéticas como Epon, Araldit...

NOTA: Este resumen ha sido tomado de la presentación de una actividad desarrollada por dos de nuestras alumnas: NAOMI GHARBAOUI  BUSTOS y  NATIVIDAD PÉREZ GALLARDO